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蛋白挂柱后洗脱不下来主要是因为蛋白和柱子结合能力太强或者洗脱条件太温和，我们可以从以下几方面考虑解决问题。
1、洗脱条件太温和：重新摸索洗脱条件，增加缓冲液中咪唑浓度或者适当降低缓冲液pH以确定最佳的洗脱条件或者更、换缓冲液的成分（换成tris-HCl缓冲液）。
2、蛋白在柱子中沉淀：适当降低上样量或蛋白浓度，用咪唑线性洗脱。使用添加剂或者改变NaCl的浓度，或者在变性的条件下洗脱（加4-8M的尿素或者4-6M的盐酸胍）。
3、非特异性的疏水或者其他作用：在洗脱液中加非离子的添加剂（例如0.2%的Triton X-100）或者增加NaCl的浓度。
4、蛋白和柱子接触时间过长：可以减少蛋白和柱子的接触时间。
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