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品牌 |
Annoron-安诺伦 | 货号 |
AS050100 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||
产品分类 |
PCR系列 | 研究领域 |
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储运条件：-20℃ 产品组成
注： 1 U=1 Weiss unit
产品简介 T4 DNA Ligase(Fast) 由携带 T4 噬菌体 gene 30 的大肠杆菌产生。 该酶催化双螺旋 DNA 或 RNA 之间的 5'- 磷酸基团和 3'- 羟基之间形成磷 酸二酯键。该酶在双链 DNA、RNA 或者 DNA/RNA 复合物间可修复单链 缺刻 , 并且可以连接有粘性末端或者平末端的 DNA 片段，但对于单链核 酸无活性，主要用于限制性内切酶酶切产物 DNA 片段克隆、基因定点突 变与 PCR 产物克隆、线性 DNA 自环化与修复双链 DNA 缺刻。 T4 DNA Ligase(Fast) 需要 ATP 作为辅助因子，在室温下完成粘性末端连接反应 仅需 10 分钟。
酶活单位定义 37℃条件下，1 Weiss unit 的酶在 20 min 内催化 1 nmol 的 [32PPi] 转变为活性炭吸附态。 1 Weiss unit 等同于约 200 个粘性末端连接反应单 位（CEU） ，相当于在 16℃条件下，30 min 内连接 50% HindIII 消化后 的 λDNA 片段。
酶活检测条件 酶活在如下反应混合物中进行测试： 66 mM Tris-HCl (pH 7.6) ，6.6 mM MgCl2 ，66 μM ATP ， 10 mM DTT ，3.3 μM [32PPi]。
质量控制 核酸内切酶残留检测 37 ℃ 条 件 下， 将 200 U 的 T4 DNA Ligase(Fast) 与 1 μg 的 pUC19 DNA 中温育 4 h，未检测出由共价闭合环状 DNA 转变为带有 缺刻的 DNA。 核酸外切酶残留检测 将酶液与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测 双链 DNA 底物无变化。
蓝白斑测试 室温条件下，使用 30 U T4 DNA Ligase(Fast) 连接 pUC57 DNA/ HindIII，pUC57 DNA/PstI 或 pUC57 DNA/SmaI 消化产物 1 h，然后用 E.coli XL1-Blue 感受态细胞转化连接产物，检测到少于 1% 的白斑。
使用方法 1. DNA 插入片段连接至载体 DNA （粘性末端连接） ① 于冰上配制如下反应体系：
② 充分混匀并瞬离， 22℃温育 10 min； ③ 取 1~5 μl 的连接产物用于 50 μl 化学感受态细胞的转化，或者取 1~2 μl 用于 50 μl 电转感受态细胞的转化。 注：如果连接反应产物用于电转化，应使用离心柱或者氯仿抽提清洁 DNA 代替热失 活步骤。 2. DNA 插入片段连接至载体 DNA （平末端连接） ① 于冰上配制如下反应体系：
②充分混匀并瞬离， 22℃温育 1 h； ③ 取 1~5 μl 的连接产物用于 50 μl 化学感受态细胞的转化，或者取 1~2 μl 用于 50 μl 电转感受态细胞的转化。 注：如果连接反应产物用于电转化，应使用离心柱或者氯仿抽提清洁 DNA 代替热失 活步骤。 |
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数量 |
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| 选择 | 品牌 | 货号 | 产品名称 | 规格 | 分类 | 研究领域 | 说明书 | 数量 | 目录价 | |
| 1 | Annoron-安诺伦 | AS050038 | Taq SYBR® Green qPCR Premix (Universal) | PCR系列 |
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￥0.00 | 订购 询价 | |||
| 2 | Annoron-安诺伦 | AS050147-AS050148 | PNGase F (with His-tag) | PCR系列 |
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￥0.00 | 订购 询价 | |||
| 3 | Annoron-安诺伦 | AS050125 | PBS | PCR系列 |
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