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RNA提取及反转录

时间:2009-05-18 作者:市场部 文章来源:市场部 浏览:8316


RNA的提取


从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取RNA,不同种类的材料中可获得的RNA量不同,因而差异也比较大,一般材料的RNA得率如下表:


材料种类

样品要求

超始量

产物量

血液 

新鲜血液及抗凝剂处理的全血

250μL

0.1~0.3 μg

培养细胞

离心收集的细胞

1×106

10μg左右

动物组织

一般材料

100 mg

5~10μg

植物

一般材料

100 mg

5~10μg

其他

具体材料需进行具体条件摸索

客户提供

由样品量决定


客户提供:

细胞样品需要新鲜培养;动物组织、植物组织等样品取样后需液氮速冻;

用于提取RNA的血液样品最好使用肝素抗凝,而不要使用EDTA,因为EDTA会螯合二价离子(Mg2+),而影响后续实验(如反转录、PCR等);可在4℃下可保存一周,-20℃下可保存1个月;

取样所使用的手套、容器等需经RNase free处理,待提取样品最好使用干冰运输。

交付成品:

实验获取的RNA样品;

交付报告:

完整的实验报告、电泳照片、OD值测定结果等。


反转录PCR(RT-PCR)

通过RT-PCR,RNA被逆转录成为cDNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录,要求保证RNA模版的完整性,并去除不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种,即鸟类成髓细胞性白细胞病毒(AMV)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(MMLV)反转录酶。

客户提供:

模板RNA或样品(本公司可代为提取RNA)等;

交付成品:

实验获取的cDNA样品;PCR扩增产物样品;

交付报告:

完整的实验报告、电泳照片、OD值测定结果等。


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