RNA的提取
从新鲜组织、血液、细胞、细菌等多种材料中提取RNA,不同种类的材料中可获得的RNA量不同,因而差异也比较大,一般材料的RNA得率如下表:
材料种类 |
样品要求 |
超始量 |
产物量 |
血液 |
新鲜血液及抗凝剂处理的全血 |
250μL |
0.1~0.3 μg |
培养细胞 |
离心收集的细胞 |
1×106 |
10μg左右 |
动物组织 |
一般材料 |
100 mg |
5~10μg |
植物 |
一般材料 |
100 mg |
5~10μg |
其他 |
具体材料需进行具体条件摸索 |
客户提供 |
由样品量决定 |
客户提供:
细胞样品需要新鲜培养;动物组织、植物组织等样品取样后需液氮速冻;
用于提取RNA的血液样品最好使用肝素抗凝,而不要使用EDTA,因为EDTA会螯合二价离子(Mg2+),而影响后续实验(如反转录、PCR等);可在4℃下可保存一周,-20℃下可保存1个月;
取样所使用的手套、容器等需经RNase free处理,待提取样品最好使用干冰运输。
交付成品:
实验获取的RNA样品;
交付报告:
完整的实验报告、电泳照片、OD值测定结果等。
反转录PCR(RT-PCR)
通过RT-PCR,RNA被逆转录成为cDNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录,要求保证RNA模版的完整性,并去除不含DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种,即鸟类成髓细胞性白细胞病毒(AMV)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(MMLV)反转录酶。
客户提供:
模板RNA或样品(本公司可代为提取RNA)等;
交付成品:
实验获取的cDNA样品;PCR扩增产物样品;
交付报告:
完整的实验报告、电泳照片、OD值测定结果等。